【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：DNA/RNA病毒環(huán)境樣本核酸提取試劑盒（吸附柱法）

英文名稱：DNA /RNAExtraction Kit for Environmental samples（Adsorption column method）

【包裝規(guī)格】50份/盒

【預期用途】

本試劑盒是專為環(huán)境樣本DNA/RNA提取而設計的，適合于從各種環(huán)境如豬場土壤、底泥、漏縫地板污物以及各種動物糞便、尿液、豬舍內(nèi)外地面、墻面和人員頭發(fā)、衣物等處，采用棉拭子蘸取足量此類樣品，從中提取高產(chǎn)量高純度的核酸DNA/RNA ，提取的DNA/RNA可直接用于PCR、測序等分子生物學實驗。

【檢驗原理】

本試劑盒采用硅膠柱純化技術(shù)，吸附柱采用高結(jié)合力的玻璃纖維濾膜做為基質(zhì)，濾膜在高濃度離子化劑（如鹽酸胍或異硫氰酸胍）條件下，可通過氫鍵和靜電等物理因素吸附核酸，而蛋白質(zhì)或其它雜質(zhì)不被吸附而去除。吸附了核酸的濾膜經(jīng)洗滌去除蛋白質(zhì)和鹽，最后可以用低鹽緩沖液（如Buffer TE）或水，洗脫出濾膜上吸附的核酸。得到的核酸純度高，可直接用于各種下游實驗。此外，S3-Cleanup Buffer溶液是我們獨創(chuàng)的腐殖酸吸附劑，該吸附劑可選擇性吸附DNA/RNA樣品中的腐殖酸等抑制因子，提高DNA/RNA純度。

【試劑組成】

【儲存條件及有效期】

本試劑盒在常溫干燥環(huán)境下可穩(wěn)定保存12個月。長期保存時需放置2-8℃。低溫時，S2-lysis Enhancer溶液可能會有白色沉淀形成，70℃水浴讓沉淀完全溶解后搖勻使用。

【自備材料】

100ml無水乙醇、采樣棉簽、水浴鍋或金屬浴、渦旋振蕩儀、離心機、1.5ml、2ml無菌離心管等試劑盒內(nèi)沒有提供的設備和耗材。

【核酸提取】

1、 加入900 ul 的S1-Lysis Buffer到Dry Bead Tube 中，然后將采集的固體樣本拭子棉頭折斷后轉(zhuǎn)移到

Dry Bead Tube；若采集的環(huán)境樣本是液體，直接轉(zhuǎn)移200-250ul混懸液到Dry Bead Tube中。

2、加入100 ul S2-Lysis Enhancer ，劇烈渦旋震蕩1 min（注意：S2使用前需充分搖勻）。

3、65 ℃ 孵育10 min后，再劇烈渦旋震蕩10min。

4、10000 rpm離心1 min，轉(zhuǎn)移上清600 ul到新的1.5 ml的離心管中。

（注意：離心后上清表面可能出現(xiàn)一層雜質(zhì)，避免吸取這些雜質(zhì)，因為這些雜質(zhì)會影響下游的擴增）

5、加入400 ul S3-Cleanup Buffer，立即徹底混勻。

（加入S3后，有條件的可選擇冰上孵育10 min，可以最大限度的去除抑制劑）

6、10000 rpm離心2 min，轉(zhuǎn)移全部上清液（約800 ul）到新的2 ml的離心管中。

7、加入1200 ul S4-Binding Buffer，渦旋混勻后，轉(zhuǎn)移700 ul到吸附柱中，10000 rpm離心1 min，棄濾液。

8、轉(zhuǎn)移剩下的全部混合液至吸附柱中，10000 rpm 離心 1 min，棄濾液。

9、吸取600ul S5-Wash Buffer 1（確保已加入無水乙醇稀釋）到吸附柱上，10000 rpm 離心 1 min，棄濾液。

10、吸取600ul S6-Wash Buffer 2（確保已加入無水乙醇稀釋）到吸附柱上，10000 rpm 離心 1 min，棄濾液。

11、將吸附柱裝回收集管中，10000 rpm 離心 1 min，棄收集管。

12、將吸附柱轉(zhuǎn)移到干凈的1.5 ml離心管中，加入50-100 ul S7-Elution Buffer，靜置1min，10000 rpm 離心 1 min，棄吸附柱，將收集的DNA/RNA 存放-20 ℃或立即使用（Elution Buffer事先預熱可提高洗脫效率）。

【注意事項】

1. 使用前需按照瓶身標簽說明向洗液5和洗液6中加入無水乙醇或95%酒精，稀釋備用；

2. 建議使用新鮮環(huán)境樣本進行提取，樣本反復凍融導致核酸的量明顯降低；

3. 請仔細閱讀本說明書，并嚴格按照操作步驟完成操作。

備注：僅供科研使用